更新时间：2019-11-07
测定意义蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。测定原理羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm处有特征吸收峰。蛋白质羰基检测试剂盒
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蛋白质羰基检测试剂盒
自备实验用品及仪器
天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿和蒸馏水，无水乙醇，乙酸乙酯。
试剂组成和配制
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂0.1g×5支，4℃避光保存。（使用前根据样品数，每支加1mL水溶解，每支为10个样品用量）
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。
试剂六：液体100mL×1瓶，4℃保存。
样品处理
组织样品：称取约0.1g组织样品，加入1mL提取液，充分匀浆后于4℃，5000rpm离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，然后取20μL测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。
测定步骤和操作表
| 空白管 | 测定管 |
样品（mL） | 0.2 | 0.2 |
试剂二（mL） |
| 0.4 |
试剂三（mL） | 0.4 |
|
混匀，37℃避光反应1h | ||
试剂四（mL） | 0.5 | 0.5 |
静置5min，4℃，12000rpm离心15min，弃上清，留沉淀 | ||
试剂五（mL） | 1.0 | 1.0 |
漩涡混匀，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀 | ||
试剂五（mL） | 1.0 | 1.0 |
漩涡混匀，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀 | ||
试剂五（mL） | 1.0 | 1.0 |
漩涡混匀，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀 | ||
试剂六（mL） | 1.0 | 1.0 |
漩涡混匀，37℃温育15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000rpm离心15min，取上清，1mL石英比色皿，试剂六调零，测定OD370 | ||
计算公式
蛋白质羰基含量（μmol/mg prot）= 227.27×（OD370测定管－OD370测定管）÷样品蛋白质浓度注意事项：
1. 试剂一使用之前根据要测定的样品数现配，配置好后4℃保存，若变为黑色，则不能使用。
2. 试剂二见光易分解，反应需严格避光。
蛋白质羰基检测试剂盒
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