更新时间:2019-11-07
测定意义样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。测定原理强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物;紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为1~10mg蛋白质,适用于蛋白质浓度高的样品,尤其是动物材料。蛋白含量检测试剂盒
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蛋白含量检测试剂盒
自备仪器和用品
酶标仪、移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
标准品:液体×1瓶,5 mg/mL,4℃保存。
样品中可溶性蛋白质提取
液体样品:澄清无色的液体样品可以直接测定。
组织样品:准确称取约0.1 g样品,加1mL提取液(根据需要,可以用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水提取),冰浴匀浆,10000rpm,4℃离心10min,取上清,即待测液。
测定
1. 酶标仪预热30 min以上,调节波长到540nm,蒸馏水调零。
2. 空白孔:取酶标板,在空白孔中加入20 μ L蒸馏水,180 μ L试剂一,混匀后室温静置15 min,于540nm测定吸光度,记为A空白。
3. 标准孔:取酶标板,在标准孔中加入20 μ L标准液,180 μ L试剂一,混匀后室温静置15 min,于540 nm测定吸光度,记为A标准。
4. 测定孔:取酶标板,在测定孔中加入20 μ L待测液,180 μ L试剂一,混匀后室温静置15 min,于540nm测定吸光度,记为A测定。
蛋白含量检测试剂盒