更新时间：2019-11-07
测定意义SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定SBE活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。测定原理淀粉和diian结合后在660nm有特征光吸收，SBE可切断支链淀粉侧支，从而降低了淀粉-dian复合物在660nm吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。淀粉分支酶（SBE）检测试剂盒
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淀粉分支酶(SBE)检测试剂盒
需自备的的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2支，4℃保存；临用前每支加入1mL双蒸水，充分溶解后备用；
试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取
称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。15000g ，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 |
煮沸1min后灭活的粗酶液 | 250 |
|
粗酶液 |
| 250 |
试剂一 | 320 | 320 |
试剂二 | 30 | 30 |
混匀，37℃准确保温20 min，置沸水浴中1 min终止反应（盖紧防止水分散失），冷却
试剂三 | 500 | 500 |
试剂四 | 40 | 40 |
混匀，室温静置10min，用蒸馏水调零，660nm处读取各管吸光值。
注意：
1、可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行1min沸水浴处理。
2、试剂一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
SBE活力单位的计算
方法（一）按照蛋白浓度计算
单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在反应体系中每降低1％dian蓝值为一个酶活性单位。
方法（二）按照样本鲜重计算
单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每g组织在反应体系中每降低1％dian蓝值为一个酶活性单位。
SBE活性（U/g 鲜重）=（A对照管-A测定管）/A对照管÷样本鲜重(g/mL) ×100
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