RTS BL21(DE3)表达感受态细胞使用方法

RTS BL21(DE3)表达感受态细胞使用方法

RTS（Room Temperature Stable）系列感受态细胞，其室温可保存3天、-20°C可保存2年（推荐保存温度）、-80°C可长期保存性能无下降。运输过程中无需干冰，可常规冰袋运输（推荐运输温度）。RTS表达感受态细胞均为热激感受态细胞，转用于蛋白表达（不可用于克隆和载体构建），经42°C热激1min可获得105～106cfu/μg效价，可满足质粒转化要求。该制品使用简单、运输、储存方便。

使用方法

 1. 从-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent融化，放置于冰上。

注意：该试剂含长链带电化合物，允许反复冻融20次，使用完毕后继续-20°C保存。

2. 取50 μl Nano E.coli Transfection Reagent置于0.2 ml EP管中，加入10～100 ng质粒DNA（不可使用连接产物），枪头吹打混合均匀，冰上放置2min。

注意：放置时间不要超过30min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。

3. 将上述混合物（50 μl Nano E.coli Transfection Reagent和质粒DNA）加入到一支RTS表达感受态细胞干粉中，枪头轻轻吹打，溶解细胞干粉，置于冰上15min。

注意：使用RTS 表达感受态细胞干粉，轻甩干粉至管底部，如果发现干粉已经溶解则不可使用。

4. 置于42°C热激1min后，迅速置于冰上急冷2min。

5. 将热激完毕的感受态细胞转移到含有450 μl不含抗生素的SOC（或LB）培养基，37°C振荡（225 rpm）培养60min。使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。

6. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。

7. 将平板置于37°C培养，12~18小时后可出现菌落。

8. 获得的表达菌，可使用IPTG进行诱导表达，从而获得重组蛋白。