更新时间：2019-11-07
测定意义：MDHAR催化MDHA还原生成AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。测定原理：MDHAR 催化 NADH 还原MDHA 生成 AsA和NAD+，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD+没有。通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算出MDHAR活性。单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）检测试剂盒
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单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)检测试剂盒
实验中所需仪器及设备：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和双蒸水
试剂组成和配置：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，室温保存。
试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前加入3 mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：液体×1瓶，4℃保存。临用前加3 mL试剂二充分溶解。
粗酶液提取：
称取约0.1g样品，加试剂一1 mL，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清液待测。
MDHAR测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL试剂三、20μL试剂四、20μL试剂五和120μL试剂二，后加入20μL蒸馏水，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值。
4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL试剂三、20μL试剂四、20μL试剂五和120μL试剂二，后加入20μL上清液，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值。
单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)检测试剂盒
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