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β-木糖苷酶检测试剂盒

更新时间:2019-11-07

简要描述:

测定意义
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。
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β-木糖苷酶检测试剂盒

测定原理

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰,测定405nm光吸收增加速率,可计算β-木糖苷酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取

  1. 植物样本:称取约0.1g样品,加1.0 mL提取液充分冰浴匀浆,然后12000rpm4℃,离心20min,弃沉淀 ,取20μL上清测定蛋白含量,剩余上清作为待测酶液。
  2. 细菌、真菌样本:收集约500万个细胞,加入1.0 mL提取液,超声波破碎(冰浴,功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000rpm4℃,离心10min,弃沉淀 ,取20μL上清测定蛋白含量,剩余上清置于冰上待测。

测定操作表

 

对照管

测定管

酶液(μL

200

200

试剂一(μL

 

50

试剂二(μL

400

350

混匀,45℃水浴20min

试剂三(μL

 400

400

混匀,静置5min 1mL玻璃比色皿,对照管调零,测定A405

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