β-葡萄糖苷酶（β-GC）检测试剂盒

β-葡萄糖苷酶(β-GC)检测试剂盒

测定意义：                          

β-GC（EC 3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。

测定原理：

β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。

自备用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入10mL双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。

试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每400万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。

2、组织的处理：称取约0.2g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。

测定步骤和加样表：

迅速混匀，放入37℃准确水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）

充分混匀，8000g，4℃，离心5min，取上清液

充分混匀，室温静置2min后，用对照管调零，400nm处测定吸光值A

β-葡萄糖苷酶(β-GC)检测试剂盒