碱性蛋白酶检测试剂盒

标题：碱性蛋白酶检测试剂盒

产品概述

碱性蛋白酶检测试剂盒

测定原理：

在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5 mL EP管和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5mL蒸馏水溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入5mL试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。

试剂四：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加20mL蒸馏水溶解。

试剂五：液体×1瓶，4℃保存。

标准品：液体×1支，0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。

粗酶液提取：

称取约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清液，即粗酶液。

测定：

1.分光光度计预热30min以上，调节波长到680 nm，蒸馏水调零。

2.试剂二、试剂三和试剂四置于40℃水浴保温30min以上。

3. 空白管：取0.5 mL EP管，加入20 μL粗酶液，40 μL试剂二，混匀后置于40℃水浴保温10min；加入40μL试剂三，混匀后10000rpm 4℃离心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL试剂四，40μL试剂五，混匀后置于40℃水浴保温20min，吸取200μL于680nm测定光吸收，记为A空白管。

4. 测定管：取0.5 mL EP管，加入20μL粗酶液，40μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min；加入40μL试剂二，混匀后10000rpm 4℃离心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL试剂四，40μL试剂五，混匀后置于40℃水浴保温20min，吸取200μL于680nm测定光吸收，记为A测定管。（注意与空白管不同，先加试剂三，后加试剂二）

5. 标准管：取0.5 mL EP管，加入40μL标准品，200μL试剂四，40μL试剂五，混匀后置于40℃水浴保温20min，吸取200μL于680nm测定光吸收，记为A标准管。

碱性蛋白酶检测试剂盒