己糖激酶（HK）检测试剂盒

标题：己糖激酶（HK）检测试剂盒

产品概述

己糖激酶(HK)检测试剂盒

测定原理

HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体30mL×1瓶， 4℃保存；

试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体5 mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入4mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；临用前每支加入2mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前每支加入250μL试剂一和250μL双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存；

样本的前处理

1、细菌、细胞或组织样品的制备

   收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤

将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中，准确反应5分钟。迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，记录5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

注意事项

1、实验前，将试剂一、二、三37℃或25℃预热10分钟，之后37℃或25℃室温放置。试剂四、五、六和样本在冰上放置，以免变性和失活。

2、如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三、四、五和六按比例配成混合液。

2、不同匀浆组织中HK活力不一样，做正式试验之前请做1-2只预试，若A2-A1>1，则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液，使A2-A1<1，以提高检测灵敏度。

3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

4、两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。

己糖激酶(HK)检测试剂盒