二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）

标题：二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）

产品概述

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)检测试剂盒

测定原理：

在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO₂结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率，还原型辅酶I氧化速率可反应Rubisco的活性。

需自备的仪器和用品：

分光光度计/、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：25mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入100uL双蒸水充分溶解待用；

试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入100uL双蒸水充分溶解待用；

粗酶液制备：

称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定

（1）工作液的配制：临用前在试剂二中加入22.5mL试剂一，充分混匀，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。

（2）在1mL石英比色皿中加入6uL样本、7uL试剂三、7uL试剂四和180uL工作液，混匀，立即记录340nm处20s时吸光值A1和2min20s时的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)检测试剂盒