淀粉含量检测试剂盒

淀粉含量检测试剂盒

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；

淀粉提取：

1. 称取约0.1g样品于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，常温离心5min，弃上清，留沉淀。
2. 沉淀中加入0.5mL双蒸水，放入沸水浴中糊化15min（盖紧，以防止水分散失）。
3. 冷却后，加入0.35mL试剂二，常温提取15min，振荡3-5次。
4. 加入0.85mL双蒸水，混匀，3000g，常温离心10min，取上清液待测。

测定操作表（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2. 调节水浴锅至95度。

3、工作液的配制：临用前在试剂三中加入7.5mL蒸馏水后，缓慢加入42.5mL浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。

4、样本测定：取0.2mL样本和1mL工作液至EP管中，95度水浴10 min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，在620 nm 波长下记录测定吸光度值A。

淀粉含量计算：

标准条件下测定的回归方程为y = 5.872x - 0.0295；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

淀粉含量(mg/mg prot)=(A+0.0295) ÷5.872 ÷Cpr=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按样本鲜重计算

淀粉含量(mg/g 鲜重)=(A+0.0295)÷5.872÷(W÷V样总) =0.289×(A+0.0295) ÷W

V样总：加入提取液体积，1.7 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g

注意：若A大于5，则需要将样本上清液适当稀释后测定。

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