乙醇脱氢酶（ADH）检测试剂盒

乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒

测定原理：

ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD⁺，NADH在340nm处有吸收峰，而NAD⁺没有；测定340nm 吸光度下降速率，来计算ADH活性。

自备仪器和用品：

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，室温保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。临用前把试剂三转移到试剂二中，4℃保存。                  

试剂三：粉剂×1瓶，－20℃保存。

试剂四：液体×1支，4℃保存。

粗酶液提取：

1、称取约0.1g样品，加试剂一1ml，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清待测。2、血清可以直接用于测定。

ADH测定操作：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min以上。

3. 空白管：在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL蒸馏水、160μL试剂二和20μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。空白管只需做1~2个。

4. 测定管：在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、160μL试剂二和20μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。

乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒