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中性木聚糖酶检测试剂盒

更新时间:2019-11-07

简要描述:

NEX在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰.
中性木聚糖酶检测试剂盒

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中性木聚糖酶检测试剂盒

测定意义
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,NEX一般分离自适生长pH为6-8的微生物。

测定原理

NEX在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算NEX活力。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

缓冲液:液体65mL×1瓶,4保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体15mL×1瓶,4避光保存。

粗酶提取

  1. 发酵液:发酵液于8000rpm4℃,离心15min,取上清,作为待测样品。
  2. 酶干粉:称约0.1mg,加提取液1mL,震荡溶解待测。

测定操作表

 

对照管

测定管

样品(μL

200

200

缓冲液(μL

300

300

试剂一(μL

 

200

试剂二(μL

300

 

混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应30min,立即沸水浴10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改变了反应体系)

试剂一(μL

200

 

试剂二(μL

 

300

混匀,沸水浴显色5min(注意不要让盖子爆开,以免进水改变了反应体系)1mL玻璃比色皿,对照管调零,测定A540

注意事项

1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。

2. 试剂盒2-8℃保存,保质期3个月,建议尽快使用。

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