中性蛋白酶检测试剂盒

标题：中性蛋白酶检测试剂盒

产品概述

中性蛋白酶检测试剂盒

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP管和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入4mL试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。

试剂四：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加20mL蒸馏水溶解。

试剂五：液体×1瓶，4℃保存。

标准品：液体×1支，0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。

粗酶液提取：

称约0.1g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液。

测定：

1.分光光度计预热30min以上，调节波长到680 nm，蒸馏水调零。

2.试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min以上。

3. 空白管：取0.5 mL EP管，加入20μL粗酶液，40μL试剂二，混匀后置于30℃水浴保温10min；加入40μL试剂三，混匀后10000rpm 4℃离心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL试剂四，40μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm测定光吸收，记为A空白管。

4. 测定管：取0.5 mL EP管，加入20μL粗酶液，40μL试剂三，混匀后置于30℃水浴保温10min；加入40μL试剂二，混匀后10000rpm 4℃离心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL试剂四，40μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm测定光吸收，记为A测定管。（注意与空白管不同，先加试剂三，后加试剂二）

5. 标准管：取0.5 mL EP管，加入40μL标准品，200μL试剂四，40μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm测定光吸收，记为A标准管。

中性蛋白酶检测试剂盒