蔗糖磷酸化酶检测试剂盒

更新时间：2019-11-07

简要描述：

测定意义
SP（EC2.4.1.7）主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷键，催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外，SP还能催化氢醌合成熊果苷，具有美白效果，在化妆品工业中具有重要应用。
蔗糖磷酸化酶检测试剂盒

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蔗糖磷酸化酶检测试剂盒

测定原理

SP能够以磷酸为受体，催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖，在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP⁺生成NADPH，导致340nm光吸收值增加。测定340nm吸光度增加速率，即可计算SP活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

缓冲液：液体40mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体2mL×1支，4℃保存。

试剂三：液体1mL×1支，4℃保存。

试剂四：粉剂1瓶，-20℃避光保存，临用前加5mL双蒸水溶解。

试剂五：粉剂1瓶，-20℃避光保存，临用前加5mL双蒸水溶解。

试剂六：粉剂1瓶，-20℃避光保存，临用前加10mL双蒸水溶解。

试剂七：粉剂1瓶，-20℃避光保存，临用前加10mL双蒸水溶解。

粗酶液提取

发酵液4℃，10000rpm，离心15min，取菌泥约0.5g，加入1mL提取液，用超声波进行破碎，功率为300w，破碎3s，间歇5s，总时间为3min，然后4℃，12000rpm，离心10min，取20μL测定蛋白含量，其余的作为待测样本。

测定操作表

	对照管	测定管
缓冲液（μL）	850	650
试剂一（μL）	500	500
试剂二（μL）	30	30
试剂三（μL）	20	20
试剂四（μL）	100	100
试剂五（μL）	100	100
试剂六（μL）	200	200
试剂七（μL）	200	200
混匀，37℃水浴预热5min
样本（μL）		200
迅速混匀，于1mL石英比色皿，对照管调零，测定340nm的初始值A₁，测定完立即放入37℃水浴准确反应2min，迅速测定340nm吸光值A₂，△A= A₂- A₁。