异柠檬酸裂解酶（ICL）检测试剂盒

异柠檬酸裂解酶(ICL)检测试剂盒

测定原理：

ICL催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD，NADH在340nm下有特征吸收峰，监测340nm吸光度的减小速率可间接反应ICL活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂三：液体×1支，4℃保存；

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入4mL双蒸水，充分混匀待用。用不完的试剂-20℃保存；

样本的前处理：

1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），15000g，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。

2、组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g ，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定

（1）工作液的配置，将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；

（2）在试剂四中加入4mL双蒸水，充分溶解待用；

（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、150μL工作液和40μL试剂四，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

异柠檬酸裂解酶(ICL)检测试剂盒