乙酰辅酶A检测试剂盒

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测定意义

乙酰辅酶A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路*氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于ATP合成。此外，乙酰辅酶A是合成脂肪酸，酮体，胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1支，-20℃保存。临用前加入500uL试剂五充分溶解备用。

试剂三：液体×1支，4℃保存。临用前加入500uL试剂五充分溶解备用。

试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加入45mL试剂五充分溶解备用。

试剂五：液体×1瓶，4℃保存。

工作液的配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.92 m L），将试剂二、三和四按照1:1:90的比例混合，或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀（可以测定48样）；加样前置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴锅中预热30 min。

乙酰辅酶A的提取

1、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每400万细菌或细胞加入1mL试剂一（如果吸光度太高，可以减少细菌或者细胞数量；如果吸光度太低，可以减少试剂一体积），超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），13000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约0.1g组织（如果吸光度太高，可以减少组织质量），加入1mL试剂一（如果吸光度太低，可以减少试剂一体积）进行冰浴匀浆；13000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1. 分光光度计预热30min，用蒸馏水于340nm处调零。

2、取920uL工作液和100uL样本至 1mL石英比色皿，混匀，立即记录340nm处20s的吸光值A1和80s时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

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