更新时间：2019-11-07
测定意义：AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。测定原理：AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。乙酰胆碱酯酶（AchE）检测试剂盒
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乙酰胆碱酯酶(AchE)检测试剂盒
自备仪器和用品：
紫外分光光度计/、微量石英比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。
试剂四：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。
粗酶液提取：
称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清液，待测。
测定：
1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min以上。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL蒸馏水、160 μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。只需做一支空白管，不需要每个样品都做空白管。△A空白管=A2－A1
4. 测定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL上清液、160 μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3
乙酰胆碱酯酶(AchE)检测试剂盒
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