乙酸激酶（ACK）检测试剂盒

乙酸激酶(ACK)检测试剂盒

测定原理：

（1）ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸，（3）乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD⁺，（4）在340nm下测定NADH氧化生成NAD⁺速率，即可反映ACK活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体18mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂三：液体×1支，4℃保存；

样本的前处理：

1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），15000g，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。

2、组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g ，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定

（1）工作液的配置，将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；

（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL样本和180μL工作液，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 3min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

乙酸激酶(ACK)检测试剂盒