HRP标记的兔抗大鼠IgM

描述：HRP标记的兔抗大鼠IgM
HRP标记抗体的方法酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法.

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产品详情/ PRODUCT DETAIL

标题：HRP标记的兔抗大鼠IgM

产品概述

HRP标记的兔抗大鼠IgM

本产品仅用于研究用途，不用于人类、治疗或诊断应用。

抗体来源	Rabbit
克隆类型	Polyclonal
交叉反应	rat
产品应用	WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
分子量	900kDa
性状	Lyophilized or Liquid
浓度	2mg/1ml
免疫原	Full length plasma protein:
亚型	IgG
纯化方法	affinity purified by Protein A
储存液	0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件	Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

HRP标记的兔抗大鼠IgM

一、戊二醛二步法

1. 原理

戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。

2. 标记步骤

（1）称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室温静置过夜。

（2）反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅拌。

（3）将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。

（4）用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml，继续搅拌3小时。

（5）加0.2M赖氨酸0.25ml，混匀后，置室温2小时。

（6）在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃ 1小时。

（7）3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，zui后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。

（8）将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PBS缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10,000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。

3. 结果判定

（1）定性及效价滴定：用特异性抗原(或抗体)同酶标记抗体(或抗免疫球蛋白抗体)作双向琼脂扩散试验或免疫电泳试验。然后用酶的底物使沉淀弧显色，可初步鉴定其活性。zui后以直接ELISA法(或在正式实验系统里)对酶结合物进行滴定( 见本节 (三)工作浓度的选择)。

（2）定量和克分子比值测定：可用分光光度计测定(光程1cm)。

酶量(mg/ml)＝OD403nm×0.4

IgG量(mg/ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.42)×0.94×0.62

（3）本法标记步骤比较简单，重复性好。缺点是酶的利用率低，一般只有2-4%的酶与蛋白质结合。

4. 试剂及器材

（1）0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，NaCl1.8克，加蒸馏水至200ml。

（2）1.25%戊二醛液：取25%戊二醛50ml与PH6.8的PBS 1ml混合。

（3）1M PH9.5碳酸盐缓冲液：取1M碳酸钠3ml与1M碳酸氢钠7ml混合。

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