组织总磷含量检测试剂盒

组织总磷含量检测试剂盒

测定原理：

总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含     量，进而可计算出组织中总磷含量。

自备仪器和用品：

离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水和浓硫酸。

试剂组成和配置：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存（强腐蚀性，强氧化性）。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入7.5mL蒸馏水，溶解后再加入5mL试剂二，混匀。

标准品：液体×1支，20μmol/L无机磷标准液，－20℃保存。

有机磷消化：

取带盖试管，加入精确称取的约0.1g组织，加浓硫酸1 mL，盖紧（防止水分散失）后沸水浴10min左右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水8.8 mL，充分混匀；室温，10000rpm，离心10min，取上清液，待测。

测定：

1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。

2.打开水浴锅，调节温度到40℃。

3. 空白管：取0.5mL EP管，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取0.5mL EP管，依次加入10μL标准液，90μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A标准管。

5. 测定管：取0.5mL EP管，依次加入10μL上清液，90μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A测定管。

注意事项：

1、试剂三需临用前配制，限当天使用。

2、测定前先用1~2个样品做预实验，如吸光值很高，需用蒸馏水做相应稀释。

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