组织及血液酸性磷酸酶（ACP）检测试剂盒

组织及血液酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒

测定原理：

在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与4-氨基安替和铁氰hua钾反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。

标准品：液体×1支，2μmol/mL酚标准液，4℃保存。

粗酶液提取：

称取约0.1g组织，加试剂一1mL充分研磨，4^oC、10000rpm离心10min，取上清液待测。血液可直接用于测定，如果浓度高的话，用试剂一稀释。

测定：

1.分光光度计预热30 min以上，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37 ^oC水浴中预热30 min以上。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。

5. 对照管：取EP管，加入200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀；后加入20μL上清液，混匀后于510nm测定吸光度，记为A对照管。

6. 测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。

其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。

注意事项：

1. 试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。
2. 试剂四变蓝绿色后不能再使用。
3. 加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不*。
4. ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。

组织及血液酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒