更新时间:2019-11-07
测定意义生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质,而且参与活性氧清除,后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH含量,能够间接测定蛋白质巯基含量。总巯基检测试剂盒
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总巯基检测试剂盒
测定原理
巯基基团与5,5’- 二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在412nm处有大吸收峰。
自备实验用品
可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体50 mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体40 mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。
样品的制备
操作步骤
| 对照管 | 测定管 |
样品(mL) | 0.2 | 0.2 |
试剂一(mL) | 0.75 | 0.75 |
试剂二(mL) |
| 0.05 |
H2O(mL) | 0.05 |
|
混匀,室温10min,双蒸水调零,1cm光径比色皿,测定OD412 |
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