线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒

标题：线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒

产品概述

线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒

测定原理

与氧化型细胞色素C不同，还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；

试剂二：5mL×1瓶，-20℃保存；

试剂三：0.5 mL×1支，-20℃保存；

试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存；

试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；

试剂六：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；

工作液的配制：将试剂五转移到试剂四中混合溶解。

线粒体复合体Ⅲ提取：

1. 准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2. 将匀浆600g，4℃离心5min。
3. 将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4. 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选做）。
5. 在沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅲ酶活性测定。

测定步骤：

1. 调零 用蒸馏水于550nm处调零。
2. 样本测定

（1）取40μL样本和800μL工作液于1mL玻璃比色皿中，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。

（2）取出比色皿，加入100μL试剂六，混匀，立即记录550nm处初始吸光值A1，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）中准确反应2min，记录550nm处2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒