线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒

标题：线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒

产品概述

线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒

测定意义

复合体Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ，同时可使O₂还原生成O^2.-，是呼吸电子传递链上产生O^2.-的主要部位。测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；

试剂二：5mL×1瓶，-20℃保存；

试剂三：0.5 mL×1瓶，-20℃保存；

试剂四：25mL×1瓶，-20℃保存；

试剂五：1 mL×1支，-20℃保存；

试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入2mL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。

工作液的配制：临用前将试剂五转移到试剂四中混合溶解。

复合体Ⅰ的提取：

• 准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
• 4 ℃ 600 g离心5min。
• 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心10min。
• 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选做）。
• 在沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅰ酶活性测定。

测定步骤：

1. 调零

用蒸馏水于340nm处调零。

1. 样本测定

（1）取40μL酶液和800μL工作液加入1mL玻璃比色皿，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。

（2）取出比色皿，加入60μL试剂六，混匀；立即记录340nm处初始吸光值A1，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）中准确反应2min，记录340nm处2min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒