α-半乳糖苷酶（α-GAL）检测试剂盒

α-半乳糖苷酶(α-GAL)检测试剂盒

测定意义：                          

α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能专一地催化α半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。

自备用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每400万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），15000g，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。

2、组织的处理：称取约0.2g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。

测定步骤和加样表（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）：

迅速混匀，放入37℃准确水浴30min

充分混匀，室温静置2min后，用对照管调零，400nm处测定吸光值A

α-半乳糖苷酶(α-GAL)检测试剂盒