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标题:大鼠雌二醇(E2)ELISA定量检测试剂盒
产品概述
【产品名称】
通用名称:大鼠雌二醇(E2)ELISA定量检测试剂盒
英文名称:Rat Progesterone ELISA KIT
【包装规格】
96T/48T
【预期用途】
仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中孕酮(PROG)的浓度。
【检验原理】
本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗孕酮(PROG)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入大鼠 孕酮(PROG)校准品和待测样本,再加入HRP标记的大鼠 孕酮(PROG)抗原(酶标抗原),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-酶标抗原的免疫复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪450nm波长上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中大鼠 孕酮(PROG)的浓度负相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中大鼠 孕酮(PROG)的浓度。
【主要组成成分】
主要成分
组分 | 数量 | 主要成分 | 开封后储存 |
校准品 | 0.3ml/管 | -- | 2-8℃14天 |
包被微孔板 | 96T/48T | 预包被固相抗体 | 2-8℃14天 |
HRP标记抗原 | 10mL | HRP标记的检测抗原 | 2-8℃180天 |
底物液A | 6mL | 0.01%过氧化氢 | 2-8℃180天 |
底物液B | 6mL | 0.1%TMB | 2-8℃180天 |
终止液 | 6mL | 2mol/L稀硫酸 | 2-8℃180天 |
样本-稀释液 | 6mL | PBS | 2-8℃180天 |
20×浓缩洗涤液 | 25mL | 0.05%Tween20 | 2-8℃180天 |
说明书 | 1份 | -- | -- |
自封袋 | 1个 | -- | -- |
不干胶 | 2片 | -- | -- |
标准品浓度依次为:16、8、4、2、1、0 ng/mL
本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、无粉一次性乳胶手套
【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。
2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
【适用仪器】
半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。
2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。
3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。
4、组织匀浆:用预冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织,剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1: 9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9 mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液5000×g离心 5-10分钟,取上清检测。
样本保存和稳定性
样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。
【检验方法】
试剂准备
1、使用前,所有的组分都要至少复温30min,确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热使结晶溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水,按1:20稀释,即1份的浓缩洗涤液,添加19份的蒸馏水。
操作程序
1. 按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
2. 从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。设置标准品孔、空白孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,空白孔不加,样本孔加待测样本50μL。
3. 除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL。
4. 用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20S,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复5次。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡30s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。
6. 将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
7. 所有孔加入终止液50μL,在450波长的酶标仪上读取各孔吸光度(OD值)。
【实验结果计算】
检测完成后,以标准品浓度做为纵坐标,对应的吸光度(OD值)作为横坐标,利用计算机软件,采用四参数Logistic曲线拟合(4-pl),创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。
如果样品被稀释,通过上述方法测的的浓度值,要乘以稀释倍数,才是样品的最终浓度。
【检验方法的局限性】
1、仅供科研使用,不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值高于最高标准品浓度值,请将样本适当稀释后,再重新测定。
6、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。
【产品性能指标】
1. 外观和物理检查:试剂盒应组分齐全,内外包装均应完整,标签清晰,液体试剂无渗漏。各组分装量不少于表1中要求。
2. 线性: 用四参数Logistic曲线拟合(4-pl),在1 ng/mL – 16 ng/mL范围内,剂量-反应曲线相关系数(r)的绝对值应不低于0.9900。
3. 精密度
3.1分析内精密度:试剂盒质控品测定结果的变异系数(CV)应不大于15.0%。
3.2批间精密度:在三个不同批次产品之间,质控品测定结果的变异系数(CV)应不大于15.0%
4. 蕞低检出限:蕞低检测浓度小于0.1 ng/mL。
5. 质控品测定值: 每次检测结果均应在允许范围内。
【注意事项】
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。戴上防护手套,实验完成后洗手。
技术提示
1、混合蛋白溶液时,避免起泡。
2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。
3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。
6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
废物处理
所有使用或未使用的试剂,所有污染性的一次性材料,应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序,每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别,进行废物和污物的处理,同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。
大鼠雌二醇(E2)ELISA定量检测试剂盒
南京亿迅生物科技有限公司出品的各类ELISA试剂盒。产品质量稳定,价格实惠,在国内各科研院所和高校拥有良好的品誉。
该类产品还有小鼠孕酮(PROG)ELISA定量检测试剂盒,小鼠组胺(HIS)ELISA定量检测试剂盒,小鼠前列腺素(PG)ELISA定量检测试剂盒,大鼠雌二醇(E2)ELISA定量检测试剂盒等。
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