辣根过氧化物酶标记的小鼠抗豚鼠IgG

标题：辣根过氧化物酶标记的小鼠抗豚鼠IgG

产品概述

辣根过氧化物酶标记的小鼠抗豚鼠IgG

本产品仅用于研究用途，不用于人类、治疗或诊断应用。

辣根过氧化物酶标记的小鼠抗豚鼠IgG

1. DAB是辣根过氧化物酶敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色，且在水及醇中稳定。DAB／金属盐染色应用的组织染色范围较广。

2. 氯萘酚可以形成一种蓝黑色产物。敏感性低于DAB，且产物可溶于醇中。它适用于当DAB反应形成较高背景或要求改变产物的颜色。

3. AEC产生红色产物，其敏感性低于DAB，但可用于DAB反应产生较高背景或要求改变产物颜色的试验。此产物可溶于醇，但不溶于水。

主要试剂

1. DAB需要的溶液

   DAB，0.05mol／LTris缓冲液(pH7.6)；

   0.3％(W／V)氯化镍／水贮存液；

   30％过氧化氢；

   DPX。

2. 氯萘酚需要的溶液

   0.03％氯萘酚，用无水乙醇溶解(贮存在-20℃)，0.05mol／LTris(pH7.6)

   过氧化氢；

   Gelvatol或者Mowiol。

3. AEC需要的溶液

   0.4％AEC用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解；

   0.1mol／L乙酸钠缓冲液(pH5.2)；

   过氧化氢；

   Gelvatol或Mowio1。

主要设备

光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。

实验步骤

1．DAB操作步骤

   1) 用9ml 0.05mol／LTris缓冲液(pH7.6)溶解6mgDAB；

   2) 加lml0.3％(W／V)氯化镍／水贮存液(也可以用等量的氯化钴替代)；

   3) 加0.1 m1 3％过氧化氢。过氧化氢一般以30％的溶液提供，贮存在4℃，此条件可以持续1个月；

   4) 如果出现沉淀，用滤纸过滤；

   5) 加此溶液至标本，并孵育1-20min水洗终止反应；

   6) 优化：如果需要可复染；

   7) 用DPX封片。

2．氯萘酚操作步骤

   1) 氯萘酚贮存液的准备：用10ml无水乙醇溶解0.3g氯萘酚，贮存于-20℃；

   2) 加100ul氯萘酚贮存液至10ml 0.05mol／LTris(pH7.6)，

   3) 加0.1ml 3％过氧化氢于水中。过氧化氢一般是以30％的溶液提供，4℃可存放1个月；

   4) 白色沉淀可用滤纸过滤去除；

   5) 加此溶液到标本中，并在室温孵育10～40min，水洗终止反应；

   6) 优化：如果需要，进行复染，但只可使用水溶性染料；

   7) 用Gelvatol或者Mowiol封片。

3．AEC操作步骤

   1) 用lmlDMF溶解4mgAEC。AEC在DMF中稳定，因此，可以用100mlDMF溶解0.4gAEC作为贮存液备用；

   2) 加lmlAEC溶液至15ml 0.1mol／L的乙酸钠缓冲液(pH5.2)中，并搅拌；

   3) 加0.15ml 3％过氧化氢于水中。过氧化氢一般是30％的溶液提供，在4℃可存放1个月；

   4) 用滤纸过滤；

   5) 加此溶液到标本中，并于室温孵育10～40min，水洗终止反应；

   6) 优化：如果需要复染，只可用水溶性染料；

   7) 用Gelvatol或Mowiol封片。