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标题：HRP标记的兔抗人IgG F（ab'）2
产品概述
HRP标记的兔抗人IgG F（ab'）2
辣根过氧化物酶(HRP)标记
(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基,加入抗体lgG后该醛基与lgG氨基结合,形成Sch氏碱。为了防止HRP中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合,在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。氧化反应末了,用朋氢化钠稳定Schf氏碱。这里介绍两种程序。
程序一
(1)将5 mg HRP溶于0.5m0.1 mol/L NaHCO3溶液中 加 0.5ml 10mmoLNaO4溶液,混勻,盖紧瓶塞,室温避光作用2小时。
(2)加075m0. mol/L Na2CO3混勻。
(3)加入0.75m小風已处理的腹水,或纯化单抗等(15mgm),混勻。
(4)称取 Sephadex G25干粉0.3g 加入一支下口垫玻璃棉的5m注射器外筒内;随后籽上述交联物移入注射器外套;盖紧,室温作用(避光)3小时或4°C过夜。
(5)用少许PBS将交联物全部洗出,收集洗出液,加1/20V体积新鲜配制的5mg/ml
NaBH4溶液,混勻,室温作用30分钟;再加入320 V NaBH4溶液,混勻,室温作用1小时或4过夜)
(6)将交联物过 Sephadex g200或 Sepharose6B(2.6×50cm层析纯化,分管收集第Ⅰ 峰。(7)酶结合物质量鉴定
克分子比值测定 酶量(mg/m)=OD403 ×0.4
IgG量(mg/m)=(OD280OD403×0.3)×062克分子比值(EP=酶量×4/gG量,一般在12之间。
酶结合率=酶量x体积/抗体,标记率一般为03-0.6,即1-2个HRP分子结合在一个抗体分子,标记率可大于06,080.90D4030D280等于04时,EP约为1
标记率=OD4030D280
酶活性和抗体活性的测定可应用E凵SA法、免疫扩散
DABH2O2显色反应测定酶结合物的酶活性,抗体活性及效
价、特异性。
(8)HRP抗体结合物的保存:加入等量甘油后,小量分装-20°℃存放,防止反复冻融;或加入等量60%甘油4℃保存;不宜加NaN3或酚防腐,否则会影响酶活性。必要时冻干保存,以BSA或脱脂牛奶作保护剂。
程序二:
(1)将5 mg HRP溶于0.3 mol/L PH8.1NaHCO3溶液中,加入1%二硝基氟苯无水乙醇溶液0.1ml室温搅拌作用1小时,以封闭HRP分子上的a和ε氨基。(2)再加1ml 0.06moL过碘酸钠溶液,在室温中避光轻搅30分钟,溶液呈黄绿色:随后加1ml 0.06moL 乙二醇，轻搅1小时，中止氧化反应。
(3)移入透析袋中，在1000ml 0.01mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液中，4°C透析过夜，更换三次缓冲液，
注意避光。
(4)吸取上述醛化好的HRP溶液3ml,加入5mgIgG的碳酸盐缓冲液1ml,室温轻搅2-3小时，避光;加入5mg NaBH4 4°C放置3小时或过夜，或换用乙醇胺(2mol/L
PH9.5)0.2ml，作用| 7小时。(5)再移入透析袋中，在0.02mol/L PH7.4 PBS中透析
24小时，更换三次缓冲液。
重要提示：
本产品仅用于研究用途，不用于人类、治疗或诊断应用。
| 抗体来源 | Rabbit |
| 克隆类型 | Polyclonal |
| 交叉反应 | hu |
| 产品应用 | WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. |
| 分 子 量 | 100kDa |
| 性 状 | Lyophilized or Liquid |
| 浓 度 | 2mg/1ml |
| 免 疫 原 | Full length plasma protein: |
| 亚 型 | IgG |
| 纯化方法 | affinity purified by Protein A |
| 储 存 液 | 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol. |
| 保存条件 | Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
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HRP标记的兔抗人IgG F（ab'）2
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025-65010873
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