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免疫组化实验就选SP检测试剂盒,效果好!

更新时间:2020-07-24      浏览次数:322

免疫组化实验就选SP检测试剂盒,效果好!

 

本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔 IgG 的免疫组化实验 DAB 显色。SP 试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有*的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

操作步骤:(以石蜡切片为例) 
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。

2. 3% H2O2 室温处理 5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗 3 次。

3.可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入 0.01M 柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔 5-10 分钟后,反复 1-2 次。冷却后 PBS(pH7.2-7.6)洗涤 1-2 次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10 分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤 2-3 次。
c、跳过此步,直接进入下一步。

4. 滴加封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体,免洗。

5. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗 4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗 37℃ 孵育 1 小时左右或 20℃ 2 小时左右,也可 4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤 3次,每次 2 分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)

6. 根据用量,用稀释液将 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 浓缩液按 1:100 稀释成工作液(1ml 稀释液加入 10ul Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 浓缩液混匀,此工作液 4℃可保存一周)。滴加 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 工作液,20-37℃ 孵育 30 分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤 3 次,每次 2 分钟。

7.根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD 浓缩液按 1:100 稀释成工作液(1ml 稀释液加入 10ul链酶亲和素-POD 浓缩液混匀,此工作液 4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD 工液,20-37℃,30 分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤 4 次,每次 5 分钟。

8.DAB 显色:根据用量,用 PBS(pH7.2-7.4)配制,按 1ml PBS 加入 50ul 20×DAB 显色液 A,加入 50ul 20×DAB 显色液 B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在 5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。

9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。对于细胞爬片,固定后,PBS 漂洗两次,再用 0.5% Triton X-100 室温孵育 20 分钟,PBS 漂洗两次,3% H2O2 处理 15 分钟;PBS 漂洗两次,接上述第 4 步。对于冰冻切片,固定后,PBS 漂洗两次,接上述第二步。

 

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