TTC染色液2％使用步骤介绍

 TTC染色液2％使用步骤介绍

【产品名称】 TTC染色液2％

【产品规格】 ：100ml               

【储存条件】 ：-20℃冰冻  

【有效期】  ：6个月                   

【产品介绍】 ：

2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC)，分子量为334.80，分子式为C19H15ClN4，CAS号为298-96-4。TTC是脂溶性光敏感复合物，最初用于检测种子生存能力，后来用于染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞，TTC是呼吸链中吡啶核苷结合酶系统的质子受体，TTC与正常组织中的呼吸酶反应而呈红色，而缺血组织内呼吸酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白色，该染色是一种用于评价组织内脱氢酶活性的大体染色方法。
  TTC染色液(2%)对心肌梗死及脑组织坏死区的观测较电镜早3～6h，较光镜早24h，多用于尸检中的新鲜心脏组织和脑组织以及实验动物模型早期梗死组织的染色。其特点：①TTC染色直接取材于新鲜组织即可染色，无需固定、包埋等步骤；②TTC染色时间短，一般20~30min；③TTC染色液可重复使用，10ml可染20张片子。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、生理盐水

2、低温冰箱

3、4%多聚甲醛或10%中性福尔马林

操作步骤(仅供参考)：

(一)脑组织染色

1、取待检新鲜脑组织样本(一 般可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑)取出后-20℃速冻20~ 30min,便于切片。

2、将待检脑组织切片,一般动物样本层厚2~ 3mm ,人的样本层厚3 ~ 5mm ,可连续切4~5张。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处;第二刀在视交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间(参考:张均田主编，现代药理试验方法)。

3、切片入TTC Stain(2%)避光浸染30 ~ 35min。

4、切片入4%多聚甲醛或10%中性福尔马林中固定4~ 24h。

5、吸干组织表面清水，应用IPP等图像分析系统测量脑梗死面积并计算大脑梗死体积。

（二）种子染色

1、取不同活力的种子用刀片做横切和沿种胚中央准确纵切,取每粒种子的一半备用。

2、将上述种子置于TTC染色液(2%)中, 37°C避光孵育20min。

3、倒出染色液，自来水冲洗2~3次，立即观察种胚着色情况。

染色结果：

注意事项：

1、 TTC Stain(2%)对人体有轻微刺激性，请注意小心防护。

2、取脑时应仔细保持大脑的完整性。

3、如果染色效果不佳，应适当延长染色时间。

4、样本越新鲜越好，为了防止正常心肌及脑组织的酶活性减弱或消失，应尽快染色。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴-次性手套操作。