结合态淀粉合成酶（GBSS）检测试剂盒

标题：结合态淀粉合成酶（GBSS）检测试剂盒

产品概述

结合态淀粉合成酶(GBSS)检测试剂盒

测定原理

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP⁺还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。

需自备的的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液：液体60mL×2瓶，4℃保存；

液体一：7mL×2瓶，4℃保存；

液体二：4mL×2瓶，4℃保存；

液体三：8mL×2瓶，4℃保存；

粉剂一：2支，4℃保存；

粉剂二：2支，4℃保存；

粉剂三：2支，-20℃保存；

粉剂四：2支，4℃保存；

粉剂五：2支，4℃保存；

粉剂六：2支，-20℃保存；

粉剂七：2支，-20℃保存；

粉剂八：2支，4℃保存；

粉剂九：2支，4℃保存；

粉剂十：2支，-20℃保存；

试剂一：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存；

试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存；

反应液Ⅰ的配制：临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支，依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。

反应液Ⅱ的配制：临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支，依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。

反应液Ⅲ的配制：临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支，依次把粉剂八、粉剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。

粗酶液制备

称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上待测。

测定步骤

混匀，30℃保温20 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却

混匀，30℃保温30 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），

冰浴冷却，10000g 常温离心10min，取上清液

混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。

结合态淀粉合成酶(GBSS)检测试剂盒