琥珀酸脱氢酶（SDH）检测试剂盒

标题：琥珀酸脱氢酶（SDH）检测试剂盒

产品概述

琥珀酸脱氢酶(SDH)检测试剂盒

测定原理

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2．6-DPIP的还原速度，代表SDH酶活性。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一：50mL×1瓶，-20℃保存；

试剂二：10mL×1瓶，-20℃保存；

试剂三：1mL×1支，-20℃保存；

试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；

试剂五：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入2mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；

试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL双蒸水，用不完的试剂4℃保存。

SDH的提取

1. 准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2. 4 ℃ 600 g离心5min。
3. 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心10min。
4. 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的SDH（此步可选做）。
5. 在沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）用于线粒体SDH活性测定。

测定步骤和加样表

37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min左右

用蒸馏水调零后，依次加各试剂到1 mL玻璃比色皿中，在加入试剂六的同时开始计时；在600 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴中，准确反应1分钟；迅速取出比色皿并擦干，600 nm下比色，记录1分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。

注意事项

1、测定过程中所有试剂和样本在冰上放置，以免变性失活。

2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入适量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

3、两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。

4、若ΔA大于0.5，需将酶液用酶提取液稀释，使ΔA小于0.5，可提高检测灵敏度。

琥珀酸脱氢酶(SDH)检测试剂盒