大多数物种的分离类型都是IgG，物种特异性抗IgG抗体能很好地工作。但注意鸟类或禽类的免疫球蛋白为IgY。生物素是一种水溶性维生素，一般归类为B复合维生素，又称维生素B4。 Alexa Fluor 488标记的兔抗生物素抗体IgG

购买能识别所有亚类的一般的抗小鼠IgG二抗，但尽可能购买抗某一特定亚类的抗体以增加特异性。生物素是一种水溶性维生素，一般归类为B复合维生素，又称维生素B4。 Alexa Fluor 350标记的兔抗生物素抗体IgG

小鼠IgG抗体还可以分为各种亚类，如IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG2c，IgG3。生物素是一种水溶性维生素，一般归类为B复合维生素，又称维生素B4。 APC标记的兔抗生物素抗体IgG

一些一抗分离类型是小鼠IgM，而有一些是IgG。购买二抗时注意分别选择抗小鼠IgM和小鼠IgG的抗体。生物素是一种水溶性维生素，一般归类为B复合维生素，又称维生素B4。 PE-CY5标记的兔抗生物素抗体IgG

二抗还必须对应一抗的类和亚类。尤其是一抗是均质的单克隆抗体时，这点 特别重要。生物素是一种水溶性维生素，一般归类为B复合维生素，又称维生素B4。 PE-Cy3标记的兔抗生物素抗体IgG

预吸附（又称交叉吸附）是为提高抗体特异性而引入的额外步骤，具体方法是利用具有潜在交叉反应性的物种（本例中为绵羊和牛的轻链）制备固定血清蛋白，然后使二抗混合物（例如含有抗兔 IgG 轻链、抗绵羊 IgG 轻链和抗牛 IgG 轻链的二抗）通过含有这种固定血清蛋白的基质。生物素是一种水溶性维生素，一般归类为B复合维生素，又称维生素B4。 PE标记的兔抗生物素抗体IgG