明胶酶谱法检测试剂盒的检测原理

1. 简介：

基质金属蛋白酶 (Matrix metalloproteinase ，MMP) 属于金属蛋白酶家族，该家族由至少 20 个成员组成，并且已知参与细胞外基质蛋白的代谢。它们以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程，其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。MMP 可通过酶谱法广泛检测。本试剂盒提供了一个简单的酶谱电泳系统，用于检测血液、体液、分泌物、细胞裂解液、细胞培养基等样品中的MMP2,MMP9酶谱及活性。

2. 检测原理：

本试剂盒采用凝胶反相酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性及其无活性前体酶原谱系。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备含有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样

品在此凝胶中进行电泳，电泳时SDS与样本中的MMP可逆性结合，导致MMP氢键和疏水键破坏而不能发挥分解明胶的作用。电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，MMP恢复活性，凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测，如果小胶加样孔为10~15个，则总计可最多检测超过500个样品。

3. 检测目的:

本试剂盒用于检测组织、细胞中MMP-2、MMP-9 酶谱活性及其前体酶原酶谱。

4、产品组成及储存：