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γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL) 活性测试盒的测定步骤

更新时间:2023-12-06      浏览次数:87

 γ-谷氨半胱氨酸连接酶(GCL) 活性测试盒的测定步骤

( Glutamate Cysteine Ligase 分光光度法 50 T/48 )

 

一、测定原理

ATPMg2*存在下,GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成y-谷氨酷半胱氨酸:同时ATP分解产生无机磷,通过测定无机磷增加速率,即可计算出GCL活性。

 

二、自备仪用品:

低温离心机、可见分光光度计、水浴锅、1L玻璃比色皿、浓硫酸、蒸馏水

 

三、试剂组成和配制:

试剂一:液体x1 瓶,4C保存:

试剂二:粉剂x1 瓶,4保存,临用前加14mL蒸馏水充分震荡溶解:

试剂三:粉剂x1 瓶,4保存,临用前加3.5mL蒸留水充分震荡溶解:

试剂四:液体x1 瓶,室温保存:

试剂五粉剂x1 瓶,4保存,临用前加30mL蒸馏水充分震荡溶解,缓缓加入1.0mL浓硫酸,边加边搅拌。

 

四、样品处理:

样本粗酶液提取详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用本所的 A045-2 总蛋白定量测试盒(考马斯亮法或者 A045-3A0454 总试盒(BCA )进蛋度的测定。

 

六、GCL测定步骤

1.分光光度计预热30min 以上,调节波长到660nm,用蒸馏水调零;

2.空白:

 

γ-谷氨半胱氨酸连接酶(GCL) 活性测试盒的测定步骤


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