大鼠环磷酸腺苷(cAMP)酶联免疫试剂盒实验原理

大鼠环磷酸腺苷(cAMP)酶联免疫试剂盒实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠环磷酸腺苷(cAMP)水平。用纯化的大鼠环

磷酸腺苷(cAMP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入环磷酸腺

苷(cAMP)，再与HRP 标记的环磷酸腺苷(cAMP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，

经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下

转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的环磷酸腺苷(cAMP)呈正相关。用酶标仪在450nm

波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠环磷酸腺苷(cAMP)浓度。

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

600pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

300pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

150pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

75pg/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

37.5pg/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，

然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此

重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止

液后15 分钟以内进行。