明胶B型溶液的制备经验

明胶B型溶液的制备经验

明胶冻干粉室温密封保存保持数年稳定。但在空气中加热到100°C，会膨胀变软，解聚产生一种碳质并伴随吡啶碱类和氨气的产生。＜35-40°C明胶膨胀且吸收5~10倍体积的水产生凝胶。明胶溶于甘油和醋酸，在热水比冷水溶解性强。几乎不溶于大多数有机溶剂比如醇类、氯仿、二硫化碳、四氯化碳、酯类、苯类、酮类和油。

一、明胶溶液的制备

1.1明胶的溶解

根据实验所需的明胶浓度，称取适量明胶粉末，加入含双蒸水或PBS缓冲液的容器内，按照以下两种方法之一：1）明胶经10 min浸泡后，用热水浴加热（温度不要超过70℃），搅拌直至*溶解；2）明胶经10 min浸泡后用小火加热（温度不要超过70℃），并不断搅拌直至*溶解；

1.2明胶的除菌

按照以下两种方法之一

1）高压灭菌：将配好的明胶溶液（常用浓度0.1%~2.0%之间）装入瓶内，121℃，15 psi，高压灭菌20min；

2）滤膜除菌：低浓度明胶溶液（如0.1%或0.2%）溶解后可用0.2μm滤膜除菌。但需多准备几个滤器，因为明胶相对比较难过滤。

1.3明胶的保存

明胶溶液稳定性比较高，置于4℃保存能长期保持稳定。【注意】：温度提高会明显降低明胶强度和粘度，导致性能降低。

二、明胶溶液的包被方法

具体的使用浓度和使用量依据细胞类型和实验目的而定。

2.1用组织培养级别的水配制2%（w/v）的明胶溶液；

2.2 121℃，15 psi，高压灭菌20-30 min；

2.3 按照5-10μL明胶溶液/cm2（或0.1-0.2 mg/cm2）的比例包被培养皿/板/瓶表面。充分覆盖包被表面。

2.4 放置37℃培养箱，至少干燥2h。吸掉多余明胶溶液，用培养基或PBS缓冲液清洗一遍，晾干后即可使用。