明胶酶谱分析试剂盒文献支持，你还在犹豫吗

简介：
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程，其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。

检测原理：
本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测，如果小胶加样孔为10~15个，则总计可检测500~750个样品。

实验小技巧：

实验过程中有出现透明条带就说明试剂盒内的底物等都是有活性的，试剂盒是没有问题的。没有MMP9和prommp2的条带  可能是活性太低  不知道孵育了多久  另外这个实验对内参定量没有特别要求需要做

①、至于WB检测有条带，明胶酶谱检测没有条带是这样的，这两种检测方法原理都不相同。一个是检测变性条件下解离的多肽，一个是活性检测。不是说一个有条带另一个一定能检测出的。

②、关于出现其他条带，最近我们也研究了，有2个解释：一个就是酶家族其他成员，另一就是酶的降解产物。

③、全血检测不出条带，这个存在的原因也是多方面的，包括样本和实验手法等等。结果一直检测不出，我们也只是给出建议。有时候实验就是这样，我们同样的样本，同一个人做实验，这次和下次的实验结果可能就*不同呢，不是说我们觉得它应该是一样的或者这个条带该出来就一定出来的。

说明：
1. 10 mM 能够EDTA*抑制MMP活性。
2. 凝胶干燥：可使用聚丙烯酰胺凝胶干胶装置室温快速干燥凝胶，作为记录保留。

染色步骤：
1. 此染色液即为工作液，使用时直接将聚丙烯酰胺凝胶放在培养皿中以考马斯亮蓝染色液覆盖凝
胶，并缓慢摇动2h；
2. 倾去染色液，用脱色液冲洗凝胶；
3. 以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动2h，倾去脱色液，再加入新脱色液进行脱色，直至获得清晰的蓝色的条带和干净的背景（通常此过程需要2～4h，也可脱色过夜至清晰的蓝色的条带和干净的背景）；
4. 对凝胶进行分析和照相，凝胶可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝胶干胶装置（P2000）对
凝胶进行处理后保存。

参考文献：
1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494
2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamide
gels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem，1980, 102,196–202