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动物组织/细胞基因组 DNA 提取试剂盒实验原理
更新时间:2021-11-18   点击次数:302次

动物组织/细胞基因组 DNA 提取试剂盒实验原理

 

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和*的缓冲液系统,提取组织和细胞的基因组 DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*新型材料,能够高效、专一吸附 DNA,可大限度去除杂质蛋白

及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组

DNA 可用于各种常规操作,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。


操作步骤: 

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入休积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机

在室温下离心。 

1、样品的处理: a、细胞:取 1×106-1×107 个悬浮培养细胞,12000rpm 离心 1min 收集细胞,贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处

理,再用预冷的 PBS 吹打成细胞悬液,然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞,尽量除去上清,加 200ul 溶液 A,

振荡至*混匀。

b、组织:组织量不宜过大,一般不要超过 25mg,可以使用匀浆器匀浆,好用液氮研磨成粉末状,再用

预冷的 PBS 或无菌水充分悬浮,然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞,尽量除去上清,加 200ul 溶液 A,振荡至

*混匀。

2、向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml),55℃放置 15min。 

3、加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml ),充分颠倒混匀,55℃水浴消化,细胞消化时间较短,组织消化时间较长,

一般需要 1-3 个小时才能完成(鼠尾需要消化过夜)。消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化*为止。

消化*的指标是:液体清亮及粘稠。

4、加入 200ul 体积溶液 B,充分颠倒混匀,如出现白色沉淀,可放置于 75℃ 15-30min,沉淀即会消失,不影

响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不*,可能导致提取的 DNA 量少及不纯,还有可能导致堵塞

吸附柱。



注意事项: 

1、试剂盒拆封后,RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。

2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DN片段较小且提取量也下降。

3、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。

4、洗脱缓冲液的体积好不少于50ul,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要

用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率


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