预染色蛋白marker特征和应用
描述:预染色蛋白分子量标准Marker在蛋白凝胶电泳和转膜时肉眼可见,因而可以动态指示蛋白条带的迁移位置。预染色蛋白Marker还可随目的蛋白一起转膜并在膜上清楚显现,因而可以用肉眼直接观察蛋白转膜是否成功。同时还能为膜的切割提供肉眼可见的指示,方便而安全地把膜分割用于多重抗体检测。在Western Blot完成后,根据预染色蛋白Marker的位置,可以方便地估计目的蛋白条带的分子量大小。
特征和应用:
即开即用
电泳时预染蛋白Marker肉眼可见
预染蛋白条带可转移到膜上
免除凝胶染色,免除膜染色
用于估计蛋白条带大小和位置。
注意事项:
1. 开管前简短离心以避免丢失。即开即用,用前切勿加热变性。
2. 推荐加样量为:每5 mm宽加样孔(1.5 mm厚凝胶)加5-10µl。更宽加样孔(>5mm)和厚凝胶( >1.5 mm)酌情多加。窄孔(<5 mm)薄胶(<1.5 mm)酌情少加。
3. 转膜后膜上没有或仅有很淡的预染蛋白Marker,说明电转移方向不对或时间不足。大孔径膜材料和非标准转膜方法能使小分子蛋白Marker穿膜而过。
4. 由于光反射的因素,肉眼观察同等量预染蛋白Marker的颜色深浅程度依次为:印迹膜上的预染蛋白>附于白色不透明衬底的凝胶上的预染蛋白>无衬底透明凝胶上的预染蛋白。
5. 电泳后预染色Marker的分离效果、是否清楚显示每一条带,取决于预染蛋白条带大小、凝胶浓度、交联度和电泳速度。