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显色基质鲎试剂盒新品推荐

更新时间:2020-11-25      浏览次数:341

显色基质鲎试剂盒新品推荐

 

显色基质鲎试剂 ( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用于体外细菌内毒素的定量检测,禁止以任何途径进入机体。

 

【原理】鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度,pH 值及无干扰物质),细菌内毒素激活 C 因子,引起一系列酶促反应,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的显色基质,使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺(pNA,λmax = 405nm) 。在一定时间内,pNA 的 生成量与细菌内毒素浓度成正关,据此,可以定量供试品的内毒素浓度。同时,对硝基苯胺(pNA)也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色(λmax = 545nm),避免了供试品本身的颜色对 405nm 处吸收峰的干扰。

 

鲎试剂:按标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂*溶解, 注意不要用旋涡混匀仪激烈振摇。溶解的鲎试剂应在 10 分钟内用完。 显色基质:按标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中,轻轻振摇使显色基质*溶解。显色基质溶液可在无污染的条件下于 4 ºC 贮存 8 小时以内。

偶氮化试剂 1:按标示量加反应终止剂盐酸于偶氮化试剂 1 中,
偶氮化试剂 2:按标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂 2 中,
偶氮化试剂 3:按标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂 3 中,
偶氮化试剂溶液可于 4ºC 贮存 1 周。 3.4 实验操作 取无热原试管,加入 100μl 细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液,或供试品。再加入 100μl 鲎试剂溶液,混匀,37ºC 温育 T1分钟。 温育结束,加入 100μl 显色基质溶液,混匀,37ºC 温育 T2分钟。 温育结束,加入 500μl 偶氮化试剂 1 溶液,混匀, 加入 500μl 偶氮化试剂 2 溶液,混匀 加入 500μl 偶氮化试剂 3 溶液,混匀,静置 5 分钟,于 545nm 波长处读取吸光度值。

 

【供试品的干扰试验】 供试品的干扰试验详见《中华人民共和国药典》2005 版中《细菌内毒素检查法》的 “光度测定法干扰试验”。

当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时,须进行干扰试验,步骤如下: 
1 选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度(设为 λm),作为供试品干扰试验中添加的内毒素浓度,配制含 λm 内毒素的供试品阳性对照,测量出该溶液的内毒素浓度,称为 Cs;
2 测量出未添加外源内毒素的供试品溶液内毒素浓度,称为 Ct;
3 计算该试验条件下的回收率 R=(Cs–Ct)/λm×100
4 当 R 在 50%~200%之间,则认为在此试验条件下供试品溶液不存在干扰作用。
5 当 R 在 50%~200%之外,需对供试品进行系列稀释(稀释倍数不得超过有效稀释倍数 MVD)或进行其它处理消除干扰,每一稀释溶液都重复步骤 1-3,直到内毒素的回收率 R 在 50%~200%之间。选择回收率 R 接近 100的稀释倍数进行内毒素检测。

 

 

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