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培养基配制过程各环节的要求

更新时间:2020-10-14      浏览次数:353

培养基配制过程各环节的要求

 

基本原理

正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础,由于微生物种类及代谢类型的多样性,因而用于培养微生物培养基的种类也很多,它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同,例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相向。

三、实验材科

(一)药品

待配各种培养的组成成分,琼脂,1mol/L NaOH溶液,1mol/l (升,统一用大写)HCl溶液。

(二)仪器

天平或台秤,高压蒸汽灭菌锅。

(三)玻璃器皿

移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

(四)其他物品

药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。

四、实验内容

(一)玻璃器皿的洗涤和包装

1.玻璃器皿的洗涤

玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中,用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。再用自来水及蒸馏水冲洗,洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。

2.灭菌前玻璃器皿的包装

(1)培养皿的包装 培养皿由一盖—底组成一套。可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。

(2)移液管的包装 在移液管的上端塞入—小段棉花(勿用脱脂棉)。它的作用是避免外界及口中杂菌吹入管内,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左有。棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时,可用一外圈拉直的曲别针,将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。

先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管放在长条报纸的一端,约成45度角,折叠纸条包住,用左手握住移液管身,右手将移液管压紧,在桌面上向前搓转,以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌。

(二)液体及固体培养基的配制过程

1.液体培养基配制

(1)称量一般可用1/100粗天平称量配制培养基所需的各种药品。先按培养基配方计算各成分的用量,然后进行准确称量。

(2)溶化 将称好的药品置于一烧杯中,先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水),用玻棒搅动,加热溶解。

(3)定容 待全部药品溶解后,倒入一量筒中,加水至所需体积。如某种药品用量太少时,可预先配成较浓溶液,然后按比例吸取一定体积溶液,加入至培养基中。

(4)调pH 一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸,然后用镊子夹取此段pH试纸,在培养基中蘸一下,观看其pH范围,如培养基偏酸或偏碱时,可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液进行调节。调节pH时,应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分。边加边搅拌,并不时用pH试纸测试,直至达到所需pH为止。

(5)过滤 用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时,此步可省去。

2.固体培养基的配制

配制固体培养基时,应将已配好的液体培养基加热煮沸,再将称好的琼脂(1.5%-2%)加入,并用玻棒不断搅拌,以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化,后补足因蒸发而失去水分。

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