产品名称:聚蔗糖-泛影葡胺分离液
规格:200mL
储存条件:本产品对光敏感,室温避光储存,保质期 1 年;无菌开封后,室温保存。
使用范围:仅供科学研究、实验使用;
严禁用于食品、药品、化妆品等用途;严禁用于医疗诊断、临床治疗等其他用途。
二、产品说明
本产品是无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液,用于分离人外周血单个核细胞。外周血单个核细胞(PBMC)包含淋巴细胞、单核细胞,各类血细胞密度存在差异:
利用密度介于 1.075~1.092 g/mL 的近等渗分离液进行密度梯度离心,不同密度血细胞会按梯度分层,实现细胞分离。
三、产品指标
| 检测项目 | 指标参数 |
|---|
| 密度 | 1.077±0.001g/mL |
| 渗透压 | 290~350 mOsm/kg H₂O |
| 无菌处理 | 0.1μm 滤膜过滤 |
四、操作步骤
1、取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠、肝素抗凝均可)或去纤维蛋白血液,使用等体积全血组织稀释液或 PBS 稀释血液。
2、离心管内加入分离液:稀释后血液体积<3mL,加 3mL 分离液;稀释后血液体积≥3mL,加入等体积分离液;管内总液体体积不可超过离心管 2/3。使用巴氏吸管将稀释血液缓慢平铺于分离液液面上方,保证两层液面分界清晰;长时间加样后离心前出现红细胞成团下沉为正常现象。
3、室温、水平转子离心:500~1000g,离心 20~30min;血液体积越大,所需离心力、离心时间越长,最高离心力不可超过 1200g,可自行摸索离心条件。
4、离心分层结果(自上而下):稀释血浆层→透明分离液层→白膜层(单个核细胞)→管底红细胞与粒细胞层。5、小心吸取白膜层细胞转移至 15mL 洁净离心管,加入 10mL PBS / 细胞洗涤液重悬洗涤,250g 离心 10min。
6、弃上清,加入 5mL PBS / 细胞清洗液重悬细胞,250g 离心 10min。
五、注意事项
A. 开封前颠倒混匀;无菌条件下启封,防止微生物污染,延长保存时间。B. 全程室温(18℃~25℃)操作,低温环境可预热分离液;4℃低温离心会大幅增加白膜层红细胞污染。C. 优先使用采血 2h 内新鲜抗凝血;禁止冷冻、冷藏血液样本,保证单个核细胞活性。D. 稀释、洗涤缓冲液 / 培养液不可含钙、镁离子,会造成血细胞凝集,降低细胞得率与纯度。E. 聚苯乙烯类塑料制品易产生静电,导致细胞挂壁,影响分离效果。F. 血液粘稠度、温度差会改变分离效果,可调整离心转速、时间优化实验条件。G. 吸取白膜时若吸入过多分离液,会混入粒细胞;吸入过多血浆层,会引入血浆蛋白、血小板污染。H. 若后续需细胞培养,采血、分离全程严格无菌操作,避免微生物污染。I. 不同动物血细胞比重、带电特性存在差异,定制分离液需告知比重、动物种属、目标分离细胞名称。
六、安全操作规范
1、实验全程穿戴实验服、防护面罩、实验手套,做好防护,禁止皮肤直接接触产品。
2、剩余废液、废弃分离液不可随意丢弃,严格按照实验室生物、化学废弃物管理规定统一处理。