香姑多糖试剂的提取工艺

香姑多糖试剂的提取工艺

香姑多糖是从香菇粉碎的菌丝体中提取,其中富含多糖和木脂素。利用在香菇顶盖和茎干生长之前出现的菌丝体,粉碎后制造的香菇制品可能可降低乙型肝炎传染力。香菇也可刺激白细胞制造干扰素。在实验室研究中其显示有助于增强免疫力。

香姑多糖的分离提取：

1、实验目的 掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。

2、实验原理 在组织中,多糖多与蛋白质以共价相结合,所以在生化产品制备工艺中,往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开,以促进多糖在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀,也可用其他方法使变性沉淀,如适当调pH和加热等。 试剂可与香姑多糖中的已糖及其糖醛酸起显色反应,生成橙黄色化舍橱,于49Ohm处比色,定量。

3、实验材料 实验器材 循环水式真空泵;旋转蒸发仪;粉碎机;恒温水浴锅;纱布;搪瓷缸;真空干燥器;721型分光光度计;15ml具塞试管。 实验试剂 (1)95%乙醇;甲醇(化学纯);乙mi(化学纯);木瓜蛋白酶(中性);纤维素 酶;0.2 mol/L十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液;10 mol/L 氢氧化钠溶液;葡萄糖标准溶液(1mg/ml,10m/m]);试液。 (2)复合酶液:以PBS缓冲液做溶剂,其中蛋白水解酶浓度为8 %,纤维素酶浓度为4%; (3)溶液:称取(AR级)10 g加水190 g溶解后,置于棕色瓶,备用。

4.实验方法步骤

(一)香姑多糖的分离：

1、预处理:取干香菇4 g,用粉碎机粉碎或捣碎。

2、提取:将捣碎的干香菇置于250 ml三角瓶中,在搅拌的条件下加7倍量水混匀, 加热至90℃,搅拌保温60 min,降温至40℃时转移到40℃水浴保温;并加入适量0.45 ml 复合酶(蛋白水解酶浓度为8 %,纤维素酶浓度为4%),pH值为自然(pH 6.4),搅拌反应60 min,然后迅速升温到90-100 ℃,灭活1min,降温后纱布过滤,收集滤液。

3、浓缩:将以上滤液置于旋转蒸发仪中,然后减压浓缩至l/5体积时,停止浓缩。

4、沉淀:将浓缩液置于搪瓷缸中,在搅拌的条件下,加1 倍量乙醇,然后静置过夜。过滤得沉淀物,滤液再加3倍量乙醇,得沉淀物。

5、干燥:将沉淀置真空干燥器干燥,即为香姑多糖。