谷丙转氨酶（ALT/GPT）检测试剂盒使用说明！
产品名称：谷丙转氨酶（ALT/GPT）检测试剂盒 微板法
检测原理：谷丙转氨酶(ALT）在37℃及PH7.4条件下，作用于丙氨酸及a-酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应30分钟后（固定时间）加入2,4-二硝基苯肼（DNPH）盐酸溶液，既中止反应，同时DNPH与酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于505nm比读吸光度并计算酶活力。
测定范围：本试剂盒可以测定各类动物血清(浆)、组织及培养细胞、细胞培养液等样本中谷丙转氨酶活力（ALT）。
自备仪器和用品：
酶标仪（510nm或505nm）、微量移液器、漩涡混匀器
试剂组成：
96T | 规格 | 组分 | 保存 |
试剂一 | 5mlX1瓶 | 谷丙转氨酶基质液 | 4℃冰箱保存6个月 |
试剂二 | 5mlX1瓶 | 2,4-二肖基苯肼液 | 4℃冰箱保存6个月 |
试剂三 | 5mlX1瓶 | 4mol/L氢氧化钠液 | 室温密封保存6个月 |
试剂四 | 1支 | 2umol/ml丙酮酸钠标准液 | 4℃冰箱保存6个月 |
试剂五 | 1支 | 0.1mol/L磷酸盐缓冲液 | 4℃冰箱保存6个月 |
0.4mol/L氢氧化钠液的配制：临用时按4mol/L氢氧化钠液：双蒸水=1:9的比例稀释，需多少配多少，室温密封保存。 | |||
操作过程（仅供参考）
1.样本前处理：
A.血清（浆）及其他液体待测样本：直接取样测定。
B.动物组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）:体积（ml）=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液待测。
C.培养细胞样本前处理：将收集好的细胞用等渗缓冲液（推荐0.1mol/L PH7—7.4磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗1—2次；1000转/分，离心10分钟，弃上清，留细胞沉淀，加入匀浆介质（推荐加入0.1mol/L PH7—7.4磷酸盐缓冲液或生理盐水），冰浴条件下超声破碎或手动匀浆，制备好的匀浆液不离心，待测。
2．操作表：
测定孔 | 对照孔 | |
基质液（ul）37℃已预温 | 2O | 20 |
待测样本（ul） | 5 |
测定孔每吸取一个样本，将吸嘴伸入孔板底部基质液中，反复吸打混匀后
37℃反应30分钟
2,4-二肖基苯肼液(ul) | 20 | 20 |
待测样本（ul） | 5 |
对照孔每吸取一个样本，将吸嘴伸入孔板底部液体中，反复吸打混匀后
37℃反应20分钟
0.4mol/L氢氧化钠液(ul) | 200 | 200 |
轻轻水平摇动96孔板混匀，室温放置15分钟，510nm波长，酶标仪测各孔OD值，以（绝对OD值=测定孔0D值减去对照孔OD值），查标准曲线，求得相应的ALT/GPT活力单位。
注意事项：
1.比色法中常用的有赖氏（Reitman-Frankel）法及金氏法（King）法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏反光光度法（速率法）作对比测定求得的。以卡门氏单位报告结果比较准确。
卡门氏单位定义：1ml液体，反应液总容量3ml，波长340nm，1cm光径，25℃，1min内所生成的丙酮酸，使NADH氧化成NAD+而引起吸光度每下降0.001为一个单位（1卡门氏单位=0.482U/L,25℃）
2.一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试剂空白孔（以双蒸水代替血清，其他和对照孔同样操作）。所以成批标本测定时，一般不需要每一标本都作本身血清对照孔，以试剂空白孔代替即可，但对严重脂血、黄疸或溶血血清，每份标本应做对照孔。
3.酶活力超过150单位时，用生理盐水稀释血清后重测。
4.一般的血清对照孔（或称标本空白孔）的吸光度作为日常质控的指标之一；如相差大，可考虑a-酮戊二酸浓度、DNPH浓度及仪器等原因引起。
5.血清中ALT在室温（25℃）可保存2天，在0--4℃可保存一周，在-25℃可保存1个月。
6.本产品仅供科研实验用，不做其它用途！
