细胞内铁离子检测原理！

细胞内铁离子检测原理！

铁是人体必需的元素之一，对人体的新陈代谢和身体健康具有重要作用，血液中铁的含量不足，就 会造成缺铁性贫血。铁存在于人体所有的细胞内，各组织、器官包括各内分泌腺都含有铁。肝脏、脾脏和 肺组织内含量较为丰富。成人体内含铁 3～5 克，大部分都以蛋白质复合物形式存在，极少部分以离子的 形态存在。本试剂盒采用亚铁嗪比色法可以定量细胞铁离子，线性范围 5~300uM。产品包括标准品和空 白对照，本试剂盒可进行 100 个样品的检测。

产品名称：细胞内铁离子检测试剂盒

规格：100T

储存：4℃保存

有效期：6个月

实验步骤：

1. 样品准备（以 24 孔板为例）： 将含铁元素 DMEM 培养过的细胞用冷的 PBS 2ml 洗两遍，将 PBS 吸弃（若不马上检测可将其冻存于 -20℃）。200ul/孔裂解液裂解细胞，置于摇床裂解 2h。

2. 标准品的稀释：用试剂盒提供的稀释用液将 3mM 的标准品母液稀释为：300 uM、150uM、75uM、 37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置 0 浓度对照反应管。

3. 将缓冲液与 4.5%高锰酸钾溶液按 1:1 混匀，称为混液 A。 注意：高锰酸钾溶液需要自备。

4. 参考下表使用 1.5ml 离心管，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高， 用裂解液适当稀释后再进行测定。

                                  空白对照                 稀释后的标准品             裂解的样品

    稀释用液                100μl                             －

   混液 A                     100μl                           100μl                         100μl

   样品                          －                                －                              100μl

   标准品工作液            －                                100μl                           －

    5. 混匀，60℃ 孵育 1h。 

    6. 冷却至室温，将管盖与管壁上的液滴离心入管底。 

    7. 加入 30ul 铁离子检测剂，混匀，室温孵育，30min。

    8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 测定吸光度。如果不能测定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范围内检测。 

    9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。

注意事项：

1.操作过程中，样品与试剂等避免与铁器接触，以防污染。

2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，检测试剂有腐蚀性，请小心操作，若不慎沾到 皮肤上请马上用清水冲洗干净。

3.本产品仅供科研实验用，不做其它用途！