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介绍实验室缓冲液配置
更新时间:2021-03-26   点击次数:2552次

介绍实验室缓冲液配置

在食品检验理化实验室里各种各样的缓冲液都需要自行配置,在我们日常的准备过程中都需要对缓冲液进行准备,缓冲液对我们日常的前处理有很大的影响,缓冲液配置也是食品检验中一种很重要的过程,以下是食品检验资格证培训小编总结的常用缓冲液配置方法,以供各位学员自行学习和配置。

苯酚/氯-仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法:1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯-仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯-仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯-仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度:1 M Tris-HCl    配制量:1 L

配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

Solution II(质粒提取用)

组份浓度:200mM NaOH,1%(W/V)SDS 配制量:500ml

配制方法:1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中,10% SDS 50ml,2N NaOH 50ml2.加灭菌水定容至500ml,充分混匀3.室温保存,此溶液保存时间zui-好不要超过一个月,注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌

Solution III(质粒提取用)

组份浓度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量:500 ml

配制方法:1. 称量下列试剂,置于500 ml烧杯中。KOAc 147g、CH3COOH57.5ml2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后,4℃保存。

0.5 M EDTA(pH8.0)

组份浓度:0.5 M EDTA  配制量:1 L

配制方法:称取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。3. 用NaOH调节pH值至8.0(约20 g NaOH)。注意:pH值至8.0时,EDTA才能*溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。6. 室温保存。

3 M 醋酸钠(pH5.2)

组份浓度:3M 醋酸钠,配制量:100ml

配制方法:1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。

PBS Buffer

组份浓度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4,配制量:1 L

配制方法:1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。NaCl8g、KCl0.2g、Na2HPO41.42g、KH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后,室温保存。注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA        配制量:1 L

配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。1M Tris-HCl Buffer(PH7.4,7.6,8.0)100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。3. 将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。4. 室温保存。

2 N NaOH

组份浓度:2 N NaOH 配制量:100 ml

配制方法:1. 量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。3. 待NaOH*溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

Solution I(质粒提取用)

组份浓度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose,配制量:1 L

配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。1M Tris-HCl(PH8.0)25ml,0.5M EDTA(PH8.0)20ml,20%Glucose(1.11M)45ml,dH2O910ml2. 高温高压灭菌后,4℃保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

2.5 N HCl

组份浓度:2.5 N HCl 配制量:100 ml

配制方法:1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸(11.6 N),均匀混合。2. 室温保存。

5 M NaCl

组份浓度:5 M NaCl 配制量:1 L

配制方法: 1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 L后,适量分成小份。3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

20% (W/V) Glucose

组份浓度:20% (W/V) Glucose,配制量:100 ml

配制方法:1. 称取20 g Glucose置于100~200 ml烧杯中,加入约80 ml的去离子水后,搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

10% (W/V) SDS

组份浓度:10% (W/V)SDS、配制量:100ml

配制方法:1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68℃加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后,室温保存。

1 M DTT

组份浓度:1 M DTT  配制量:20 ml

配制方法:1. 称取3.09 g DTT,加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后,-20℃保存。

10 mM ATP

组份浓度:10 mM ATP 配制量:20 ml

配制方法:1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O,加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。3. 适量分成小份后,-20℃保存。

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

组份浓度:1.5 M Tris-HCl,配制量:1 L

配制方法:1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10 M 醋酸铵

组份浓度:10 M 醋酸铵、配制量:100 ml

配制方法:1. 称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中,加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

 

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