庆祝我司合作客户成功发布关于脑缺血损伤的文献

标题：《GPR91在小鼠深低温低流量脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究》

摘要：背景:深低温低流量技术(Deep Hypothermic Low Flow,DHLF)是目前主流的体外循环技术,在心脏手术的过程中,其不仅能保证大脑的基础代谢和氧气消耗,还能提高神经细胞对缺氧的耐受能力,减轻心脏手术过程中的神经损伤。然而经过长时程的DHLF后,中央神经系统仍会出现较严重的缺血再灌注损伤,意识障碍、认知障碍和神经心理学障碍等神经系统的损伤均已见报导。GPR91是线粒体相关的G蛋白偶联受体,其在DHLF病理过程中的具体机理目前还不清楚。因此,本次研究拟探讨GPR91在DHLF后脑缺血再灌注损伤中的具体作用和分子机制,为寻找分子干预的有效靶点提供理论基础。 方法:本次研究将通过生物信息学分析,探究m RNAs表达谱情况;通过q RTPCR技术检测患儿DHLF前后血液中GPR91表达水平;建立DHLF模型,通过q RT-PCR和Western Blot技术验证GPR91在DHLF模型大脑皮层m RNA和蛋白的表达;应用HE染色、尼氏染色、旷场实验、斯金纳箱实验和改良行为学评分检测小鼠神经损伤程度;通过Western Blot技术验证GPR91、PKCδ、磷酸化PKCδ、Bax、Bcl-2、P53等蛋白的表达情况;建立深低温糖氧剥离再灌注模型,应用si RNA和质粒转染技术,结合流式细胞学、免疫荧光染色及免疫印迹等实验,通过体内和体外实验验证GPR91对PKCδ/P53的调控和对凋亡的影响。 结果:生物信息学的结果显示,G蛋白偶联受体、PKC和P53参与脑缺血再灌注损伤后的生物性过程和信号转导,GPR91是脑缺血再灌注损伤的关键基因,q RT-PCR结果表明,在患儿DHLF后的血液样本中,GPR91m RNA的表达明显升高。q RT-PCR和Western Blot验证结果表明,在DHLF小鼠模型的脑组织中,GPR91 m RNA和蛋白的表达有明显的升高。敲除GPR91可使DHLF模型后的小鼠坏死的神经细胞减少,同时也可使小鼠的空间学习和记忆能力得到提高。体外实验证实,在GPR91敲除深低温糖氧剥离再灌注(h OGD-R)造模后,ROS下降,JC-1升高,Bax、磷酸化和总PKCδ,P53的表达明显减少Bcl-2的表达明显上升,而磷酸化后的PKCδ,其表达下降的幅度比PKCδ的表达下降的幅度要大,ROS升高,JC-1下降。在抑制PKCδ,h OGD-R造模后,Bax、P53的表达明显减少,ROS下降,JC-1上升,Bcl-2的表达明显上升,回复实验表明,GPR91可以通过磷酸化PKCδ,使P53表达水平提高,ROS升高,JC-1下降,进而使细胞凋亡减少。 结论:本研究揭示了GPR91在小鼠DHLF脑缺血再灌注损伤中的调节机制,GPR91通过调控PKCδ/P53信号通路影响线粒体功能从而使神经细胞凋亡损伤脑组织。