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测定意义:
无机磷主要指磷酸根,参与生物体内多种代谢,包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等等,此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。
测定原理:
钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质,通过测定660nm光吸收,即可计算无机磷含量。
实验中所需仪器及设备:
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前配制,加入20 mL蒸馏水,充分溶解后加入试剂二(全部),混匀。
标准品:液体×1支,2 μ mol/L无机磷标准液,4℃保存。
无机磷提取:
称取约0.1g组织,加试剂一1.0 mL冰上充分匀浆,4℃,10000rpm,离心10min,取上清液,待测。
无机磷磷含量测定操作:
1. 分光光度计预热30 min以上,调节波长到660 nm,蒸馏水调零。
2.打开水浴锅,调节温度到40℃。
3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸馏水,500μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度,记为A空白管。
4. 标准管:取EP管,依次加入50μL标准液,450μL蒸馏水,500μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度,记为A标准管。
5. 测定管:取EP管,依次加入50μL上清液,450μL蒸馏水,500μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度,记为A测定管。
需在40min内完成比色。
亿迅生物科技有限公司是一家集生物技术咨询、实验室耗材、科研试剂的销售、推广和售后服务为一体的高科技生物企业,为各大科研机构、高校、技术生物企业提供相关产品。公司凭借良好的产品质量和营销团队的奋力开拓,市场空间逐步扩大,营销网络覆盖全国,为客户供应服务,、用心的服务赢得了众多企业的信赖和好评,在生物设备领域迅速崛起。
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